蛋白电泳是生命科学研究中不可或缺的核心技术，而缓冲液的选择直接影响电泳的分辨率、条带清晰度及后续实验的成败。如何为您的实验挑选最合适的缓冲液？
一、核心缓冲液类型与适用场景
1.Tris-Glycine缓冲系统 (SDS-PAGE标准)
组成：Tris碱＋甘氨酸 (Glycine)＋SDS（十二烷基硫酸钠）。
原理：Tris提供缓冲能力，Glycine作为前导离子，SDS使蛋白质均匀带负电荷。
优势：分辨率高、适用范围广（尤其适合分子量10-250 kDa的蛋白质）。
应用：变性蛋白电泳（SDS-PAGE）的黄金标准。
2.Tris-Tricine缓冲系统
组成：Tris碱＋Tricine（三羟甲基甘氨酸）。
优势：特别擅长分离小分子量多肽和蛋白质（<10 kDa），条带更锐利。
应用：小分子量蛋白、多肽分析。
3.Tris-Acetate缓冲系统
组成：Tris碱＋乙酸。
优势：适用于分离大分子量蛋白质（>150 kDa），凝胶强度更高。
应用：大分子量蛋白复合物、膜蛋白分析。
4.非变性（Native）缓冲系统
常见类型：Tris-Glycine(不含SDS)等。
特点：不含变性剂（如SDS），保持蛋白质天然构象和活性。
应用：天然蛋白分析、酶活性检测、蛋白质相互作用研究。
二、选择缓冲液的五大关键考量因素
1.实验目的：
变性分析(SDS-PAGE)：首选Tris-Glycine-SDS或Tris-Tricine-SDS(小蛋白)。
天然构象分析：选择不含SDS的Tris-Glycine或专用非变性缓冲液。
Western Blot转印：需考虑缓冲液与转印膜的兼容性（常用Tris-Glycine）。
2.目标蛋白特性：
分子量：小分子量选Tris-Tricine；大分子量选Tris-Acetate；常规范围选Tris-Glycine。
等电点(pI)：非变性电泳中，缓冲液pH需远离目标蛋白pI以保证其溶解性和迁移方向。
3.凝胶类型：
聚丙烯酰胺浓度：不同缓冲系统对凝胶孔径有影响。
预制胶vs.自灌胶：严格遵循预制胶说明书推荐的缓冲液。
4.缓冲液性能：
缓冲能力：确保电泳过程中pH稳定（常用pH 8.3-9.0）。
离子强度与导电性：影响电泳速度、产热和分辨率。需与电压设置匹配。
兼容性：与染料（如考马斯亮蓝、银染）、下游应用（如质谱、Western Blot）兼容。
5.便捷性与成本：
预制缓冲液：节省时间，保证批次一致性，减少配制误差。
自配缓冲液：成本较低，可灵活调整配方，但需严格保证试剂纯度和操作规范。
三、常见问题与优化建议
条带弥散/拖尾： 检查缓冲液pH是否准确、离子强度是否合适、是否过期或被污染。尝试新鲜配制或更换批次。
电泳速度过慢/过快： 调整电压或检查缓冲液离子强度/导电性。
背景过高（如Western）： 确保缓冲液纯净，不含干扰杂质。
迁移异常： 在非变性电泳中，检查缓冲液pH是否导致蛋白沉淀或电荷异常。
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