胰酶是一种蛋白酶,酶切位点是肽链的Lys或Arg两个残基的羧基端肽链,通过在特定位置上降解蛋白,使细胞膜和培养皿结合处蛋白降解,从而使两者分离。这时细胞由于自身内部细胞骨架的张力以及培养液表面张力的作用下成为球形。
动物胰酶普遍用于血清培养。不同的细胞加入胰酶的成分和浓度不一样。贴壁不牢和半贴壁细胞尽量使用浓度0.05%不含EDTA的胰酶且不需要放在培养箱孵育,这样易于控制,对细胞的伤害也降到最低。对于难消化的细胞就需要使用含EDTA的0.25%的胰酶,而不是无限地延长消化时间。那么,EDTA有什么作用呢?许多人不用胰酶,只用EDTA,或者用胰酶/EDTA联合作用。胰酶切割负责粘连和附着的蛋白,而EDTA通过螯合Ca2+,抑制Integrin的贴壁活性,所以EDTA的作用更加温和。
重组胰酶一般用于无血清培养。重组胰酶具有与动物源性胰蛋白酶相同的酶学性质,但是不含任何动物源成分,可替代胰蛋白酶使用(常用于细胞治疗)。NeptryTM消化液(EC:3.4.21.4)是一种来源于 Fusarium oxysporum的胰蛋白酶样蛋白酶,该酶是从大肠杆菌中表达纯化而来。该酶与胰蛋白酶的酶切位点和pH活性范围一致,能对蛋白序列中精氨酸和赖氨酸的羧基端肽键进行切割。
NeptryTM消化液,堪称传统胰酶的完美替代者。无杂酶,无外源性或内源性病毒污染,无PMSF(蛋白酶抑制剂:苯甲基硫酰氟)、EDTA等任何蛋白酶抑制剂,较传统的胰酶使用方便,在细胞培养实验中减少了很多不必要的操作,细胞培养效果大大提高。
中科百抗NeptryTM消化液是一种胰蛋白酶类似物(Trypsin Like Enzyme),是一种通过生物工程制备的非动物源性重组蛋白酶,与胰蛋白酶有相似的解离动力学,稳定性更高,纯度更好,消化更温和,细胞毒性更低。目前主要应用于细胞培养中,在赖氨酸和精氨酸的C末端进行切割肽键,可以替代猪或牛胰蛋白酶(Trypsin)对贴壁细胞的消化解离。生物制药中,GMP级别的NeptryTM能够为疫苗生产、病毒载体生产提供高质量和高性价比的贴壁细胞消化解决方案。