中科百抗NeptryTM消化液是一种胰蛋白酶类似物(Trypsin Like Enzyme),是一种通过生物工程制备的非动物源性重组蛋白酶,与胰蛋白酶有相似的解离动力学,稳定性更高,纯度更好,消化更温和,细胞毒性更低。目前主要应用于细胞培养中,可以在赖氨酸和精氨酸的C末端切割肽键,可以替代猪或牛胰蛋白酶(Trypsin)对贴壁细胞的消化解离。生物制药中,GMP级别的NeptryTM能够为疫苗生产、病毒载体生产提供高质量和高性价比的贴壁细胞消化解决方案。
一、产品主要用途
1.用于组织块的消化解离和原代细胞的获取
2.用于贴壁细胞的传代消化和收获
3.用于微载体方法培养的细胞消化和收获
二、产品特点
图1 NeptryTM 3D结构图
1.消化温和
NeptryTM纯度高,酶切特异性好,减少多种酶的裂解而造成的细胞损伤。
2.室温稳定
NeptryTM 2-8℃下可保持稳定24个月,室温稳定,节省冰箱存储空间。
3.方便使用
直接替代胰蛋白酶消化操作流程,培养基稀释即可,无需胰蛋白酶抑制剂。
4.无动物源(AOF)
与动物源胰蛋白酶不同,NeptryTM没有动物来源成分,极大程度上减少外来污染。
5.应用范围广
NeptryTM是有血清或无血清环境中培养的多种不同细胞系消化的理想选择。
三、质量参数
NeptryTM消化液与胰蛋白酶具有类似的功能,由大肠杆菌(E.coli)重组表达,GMP条件生产。在性能和储存上可完全替代传统动物源胰酶,让细胞消化更加高效便捷。
*酶活性单位定义:25℃,pH 7.6,反应体系3.2 mL(1cm 光路),每分钟酶解BAEE(N-Benzoyl-L-Arginine-Ethyl ester)使253nm波长吸收值增加0.003定义为一个活力单位(Unit/mg protein)(2020版《中国药典》)。
四、产品测试
NeptryTM消化液在保证消化效果的基础上,相较于传统胰蛋白酶,纯度更高,分子更加稳定,活性保持更加优异。
1.酶纯度高
NeptryTM消化液对细胞较胰蛋白酶更加温和,最大限度减少对细胞的伤害,使用过程中不需要胰酶抑制剂中和活性。可对胰蛋白酶产品以及胰酶类似物等同类产品无缝切换。
图2 RP-HPLC酶纯度检测(A)猪胰蛋白酶典型色谱图,(B)Neptry的纯度
图3 SEC-HPLC酶纯度检测(纯度为99.28%)
2.超强稳定性
NeptryTM消化液在稳定性方面做到了对胰蛋白酶的全新超越,带来便捷使用的同时,也带来更大的冷冻空间,为物料储存节能增效。
图4 NeptryTM消化液在4℃和室温条件下可以长时间保存。37°C下保存1周,仍保持80%的酶活性。
图5. NeptryTM消化液在4℃放置5个月过程中,还原(R)和非还原(NR)SDS-PAGE蛋白胶纯度检测,无降解以及聚集。
3.细胞消化高效/温和,低细胞毒性
NeptryTM消化液对细胞较胰蛋白酶更加温和,最大限度减少对细胞的伤害,使用过程中不需要胰酶抑制剂中和活性。可对胰蛋白酶产品以及胰酶类似物等同类产品无缝切换。
NeptryTM消化液细胞实验数据(T25培养瓶)
从消化实验数据来看,NeptryTM消化液效果优异,细胞24h贴壁状态良好。
4.操作简便,无需抑制剂,无需改变消化流程
简化NeptryTM消化液细胞消化流程(以HEK293FT例),与胰蛋白酶操作流程一样,且无需血清中和及消化终止。