外周血单个核细胞（Peripheral blood mononuclear cell,PBMC)是外周血中具有单个核的细胞，包括淋巴细胞和单核细胞。血液样本中单个核细胞包括淋巴细胞和单核细胞等细胞，其细胞密度为1.075～1.090g/ml，与其他细胞不同，红细胞和粒细胞等细胞密度较大，为1.090g/ml 左右，血小板为1.030～1.035g/ml。因此，外周血单个核细胞主要的分离方法是密度梯度离心法，使一定密度的细胞按相应密度梯度分布，从而将各种血细胞加以分离。
外周血单个核细胞分离具体方法如下（以血液样本量12mL为例）：
（1）取新鲜抗凝血12 mL，与生理盐水或其他等渗溶液1:1混匀。
（2）取一支50 mL离心管，加入12 mL外周血单个核细胞分离液，将稀释后血液小心缓慢加于分离液之液面上。
（3）使用高速冷冻离心机（Thermo，型号Sorvall ST 40R）800g离心20 min，升速2，降速2，离心温度20±2℃。
（4）小心吸取单个核细胞层到新的50 mL离心管，加入30 mL生理盐水或其他等渗溶液混匀，室温250g离心10 min，小心弃掉上清，去除残余血小板。
（5）重复步骤（4），将会去除绝大部分血小板。
（6）将细胞用缓冲液或培养基重悬后进行检测、培养等后续操作。
注意：血液需为新鲜的抗凝血，血液收集时应无菌操作且在储存、处理和运输过程中避免冷冻和冷藏。
