RPMI 1640培养基因其配方稳定、适用范围广，被广泛用于淋巴细胞、白血病细胞以及多种肿瘤细胞的体外培养。然而，许多研究人员在使用过程中会发现细胞生长速度减慢、形态异常甚至大面积死亡。这些现象的根源，往往隐藏在培养基成分状态与血清使用策略之中。本文将从生命科学的角度，系统解析培养基与血清导致细胞生长不佳的关键因素。
一、培养基质量与稳定性
1.培养基组分失效或污染
常见表现：细胞突然停止生长、活力显著下降、培养液浑浊或pH颜色异常。
原因分析：
·过期与储存不当：RPMI 1640需在避光条件下于2–8℃储存，开封后最好在4周内用完。反复冻融或长时间暴露在室温会加速组分降解。
·沉淀析出现象：高浓度磷酸盐和碳酸氢钠在低温或CO₂不足时易产生沉淀。此类沉淀并不一定表示污染，但可能影响溶液均匀性。
·微生物污染：细菌或真菌污染会导致培养液浑浊、颜色变化，并快速影响细胞生存。
解决建议：丢弃污染或失效培养基，严格无菌操作，确保使用新鲜的合格制品；沉淀可在37℃水浴复溶并充分摇匀。
二、胎牛血清（FBS）的质量与应用
2.血清批次差异
关键作用：FBS为细胞生长提供必需的营养因子与信号分子，不同批次对特定细胞系的支持能力差异显著。
问题表现：贴壁不良、生长缓慢、克隆形成率低。
排查要点：
·质量与批次验证：在正式实验前，应用目标细胞系测试不同批次血清，以筛选最佳支持力。
·浓度设置：常规细胞通常使用10% FBS；原代或难养细胞可能需要提高至15–20%。
3.热灭活与储存
·灭活时间过长：超过60分钟的高温处理会破坏血清中的生长因子。
·灭活不足：可能残留补体，对某些实验造成干扰。
·冻融与保存条件：胎牛血清应在-80℃长期保存，并分装避免反复冻融，减少沉淀与活性损失。
解决策略：使用经过批次验证的高质量FBS；标准化灭活方法（56℃，30分钟）；优化分装与储存流程。
三、经验提示
1.在细胞生长问题初步排查时，可从培养基与血清的有效期、储存方式和批次差异入手。
2.对敏感细胞系，应定期进行血清性能验证，避免因更换批次造成生长差异。
3.培养基沉淀并非绝对污染，但需区分无害沉淀与微生物腐败的一致性证据。
