近年来,随着许多与疾病和细胞过程相关的基因被确定为治疗的潜在靶点,生物疗法已成为很多疾病的有效治疗方法。基因治疗与细胞治疗都属于生物疗法范畴。基因治疗是将转基因材料转移到患者的组织或细胞中,来达到纠正异常基因引起的特定疾病的目的。细胞治疗是指采用生物工程的方法获取具有特定功能的细胞,并通过体外扩增、特殊培养等处理后,使这些细胞具有增强免疫、杀死病原体和肿瘤细胞等功能,从而达到治疗某种疾病的目的。然而,如何实现高效的基因递送是开发生物疗法药物的关键限制因素之一。目前,病毒载体,例如慢病毒(LV)载体和腺相关病毒(AAV)等已成为生物疗法中常用的递送工具,已被证明拥有较高的安全性和高效的靶向递送力。
慢病毒可以将6 kb以内的基因永久整合到人源细胞系。第三代慢病毒生产通过四质粒共转来实现:一个包含目的基因的转移载体质粒(如pLenti-MP2)和三个包含不同慢病毒包装和包膜基因的质粒(如pMD2.G,pDMLg/pRRE,pRSV-Rev)。这些质粒被共转染到HEK293T细胞中,并在细胞培养过程中向培养基中释放转染慢病毒,进而收获慢病毒,此外,也可以通过慢病毒转染将目的基因永久整合到HEK293T或其他人源细胞系中。
重组腺相关病毒(rAAVs)是一种相对安全可靠的基因转移和稳定表达的工具。rAAV的生产通常采用三质粒共转染:一个含有目的基因的转基因质粒,两个含AAV包装基因的质粒。这些质粒被共转染到HEK293细胞后,将产生含有插入目的基因的感染性rAAV。转染几天后,rAAV可以从细胞中收获,纯化,将基因插入特定组织。
聚乙烯亚胺PEI线性转染试剂是目前应用最广泛的rAAV质粒共转染HEK293细胞的方法之一。与钙介导的转染相比,PEI更可靠;与脂质体介导的转染相比,PEI具有更好的可扩展性和成本效益。已在众多研究文献种被证明是创建高传染性rAAV/LV的有效选择。
PEI线性转染试剂作为体内外基因递送的金标准转染试剂,已有悠久的历史。PEI是一种阳离子聚合物,可以与核酸形成带正电荷的复合物,该复合物容易和细胞表面相互作用,通过细胞内吞作用转运到细胞质中,最终使PEI/核酸复合物递送到细胞核。PEI介导的转染比其他方法更具有优势,首先PEI在不同的细胞类型中都具有良好的耐受性,包括用于生物加工的细胞系;其次,PEI对于贴壁和悬浮细胞培养体系都具有低毒性和相容性。中科百抗提供高品质的科研级转染试剂——Bestop™PEI线性转染试剂(BM350101)。
产品优势
Bestop™PEI线性转染试剂(BM350101)具有许多优势,使其成为细胞/基因治疗药物生产商进行工艺开发、临床试验和商业化生产值得信赖的选择。
Bestop™PEI线性转染试剂,有粉末和液体两种形式,满足基因/细胞治疗原料的质量和监管要求。可以完全水解,易于操作且提供更高的转染效率,Bestop™PEI线性转染试剂产品不同批次保持高度一致性。
转染后的细胞状态极大的影响着最终的产毒量,选择适合的转染试剂能够尽可能的减少因转染试剂导致细胞受损造成的细胞产毒能力不足。Bestop™PEI线性转染试剂具备高效的转染能力,同时兼顾低毒性,能够有效避免对细胞的损伤,利于转染后细胞存活。
Bestop™PEI线性转染试剂适用于各种细胞系和细胞类型。与同类PEI产品相比,对CHO细胞系和HEK293细胞系转染效率较高;在贴壁和悬浮培养中均可产生高产量病毒/蛋白。