血清是细胞培养不可替代的“液体培养基”，提供生长因子、贴壁因子、微量元素与激素。实验成败70%取决于血清质量与操作细节。本文重点介绍胎牛血清使用的四大误区与解决方法，助您高效完成实验。
一、解冻：温度梯度≠繁琐，而是保护蛋白活性
误区：-20 ℃→37 ℃水浴“速溶”，10 min搞定。
风险：温差>60 ℃，白蛋白与脂蛋白瞬间析出，后期过滤堵膜、细胞贴壁率下降30%。
正解：
① -20 ℃→4 ℃过夜（12 h），让冰晶缓慢重溶；
② 4 ℃→室温 30 min，减少瓶壁局部过热；
③ 37 ℃水浴，每10 min轻摇1次，总时长≤40 min；
④ 融化后立刻分装，24 h内使用或回冻-80 ℃，禁止二次冻融。
二、保存：-80 ℃与4 ℃的“红线”
1.未开封原瓶：-20 ℃可存2年，-80 ℃可延至5年，但需避光铝箔袋密封，防止冷柜干燥失水。
2.已融化血清：按单次用量50 mL/管分装，4 ℃仅暂存≤7天；长期存请回冻-80℃，并记录冻融次数≤2次。
3.沉淀处理：3500 rpm、10 min离心，取上清使用；沉淀≠污染，多为纤维蛋白原，离心后不影响细胞增殖。
三、灭活：56 ℃ 30 min的“度”与“量”
误区：整瓶2 L直接丢进56 ℃水浴，温度探头显示实际仅52 ℃，补体未灭活完全。
正解：
① 融化后分装≤500 mL/瓶，保证热穿透；
② 水浴预温56 ℃±0.5 ℃，放入后每5 min轻摇，30 min立即转移至冰水浴迅速降温；
③ 取样做补体CH50检测，活性<5%视为合格；
④ 灭活后7天内用完，避免生长因子持续降解。
四、替换：梯度换血，让细胞“软着陆”
直接0→10%新血清，72 h内倍增时间延长50%，凋亡率升高3倍。
推荐四阶段法：
Day 0 75%原血清+25%新血清
Day 2 50%原血清+50%新血清
Day 4 25%原血清+75%新血清
Day 6 100%新血清
每阶段记录细胞密度、形态与倍增时间，CV<10%方可晋级。
五、质检：让数据替血清说话
1.细胞增殖测试：选本实验室最敏感细胞（如Vero、CHO-K1），72 h倍增时间≤控制±10%。
2.血红蛋白≤20 mg/dL，内毒素≤5 EU/mL。
通过质检批次纳入“白名单”，建立内部共享库，减少重复验证。
胎牛血清不是“开箱即用”的耗材，而是需要温度、时间与梯度共同配合的“精密试剂”。掌握解冻、保存、灭活与替换四步核心，即可让每一次细胞实验都事半功倍。中科百抗可提供预分装小包装胎牛血清，欢迎在线申请试用。
